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抗肝癌实验:白藜芦醇防治肝癌实验报告

●实验目的
观察白藜芦醇对小鼠肝癌Hepal-6细胞凋亡及活性氧(ROS作用。
●实验方法
MTT比色法检测白藜芦醇对Hepal -6细胞增殖的影响;Hoechst33258染色检测细胞凋亡形态;流式细胞术检测细胞凋亡;WestemBlot法检测活化型Caspase-3;2,,7,—二氯氢化荧光素乙二脂DCF-DA)染色法结合荧光酶标仪检测细胞内ROS的产生。
●实验结果
与对照组比较,20、40、80”mol/L白藜芦醇作用24、48、72 h均可显著抑制肝癌Hepal-6细胞增殖,呈一定的时间与剂量依赖性。不同浓度白藜芦醇作用48h可促使Hepal-6细胞凋亡,呈现细胞凋形态改变,同时伴有活化型Caspase-3及ROS的产生。
本实验结果显示白藜芦醇作用后Hepal -6细胞可以检測到Caspase-3活化型17kD剪切产物,并随药物浓度的升高而增强,提示芦醇可以活化Caspase-3,白藜芦醇诱导Hepal-6细胞凋亡可能活化Caspase-3相关。本研究亦发现白藜芦醇作用Hepal-6细胞,细胞内ROS产生增加,提示白藜芦醇抑制肝癌细胞生长,诱导细胞凋亡可能与细胞内ROS产生相关。
本研究显示白藜芦醇作用后Hepal -6细胞可以吸收hst33258,细胞核或细胞质内可见浓染致密的蓝色荧光颗粒及明显核形态变化;同时AnnexinV-FITC/PI染色显示,不同浓度白藜芦醇作用后Hepal-6细胞出现明显凋亡,提示白藜芦醇可诱导Hep-al-6细胞发生凋亡;Caspase蛋白水解酶家族是凋亡通路上的关键酶,而Caspase-3是内外源通路中细胞凋亡共同执行蛋白酶,活C的Caspase-3被剪切产生的17 kD和12 kD片断,进而裂解下游蛋底物,导致DNA片段化诱发细胞凋亡,故研究Caspase-3活性具有要意义。
综上所述,本研究结果提示白藜芦醇在体外可以抑制Hepal-6细胞增殖,促使Hepal-6细胞凋亡,并可能与活化Caspase-3及ROS产生相关;虎杖、葡萄藤等中草药作为白藜芦醇原料药是否具有类似的作用,值得进一步研究。
(责任编辑:白藜芦醇)

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